Interleukin receptorok összeszerelődésének nyomonkövetése az expresszió során

A limfociták aktivációját és differenciálódását szabályozó citokinek közé tartozó interleukin-2 és interleukin-15 receptorai három polipeptidláncból felépülő komplexek: a ligand által kiváltott jel továbbításáért a közös β- és γc-alegységek, míg a ligand specifikus kötődéséért a saját α-láncok a felelősek. A közös jelátvivő alegységeknek köszönhetően számos közös funkcióval rendelkeznek, viszont más immunfolyamatokban egymással ellentétes szerepet játszanak. Az IL-2R és IL-15R több formában jelenik meg a membránban, attól függően, hogy a receptorok mely alegységekből tevődnek össze: kis affinitású monomerek (IL-2/15Rα), közepes affinitású dimerek (IL-2/15Rαβ és IL-2/15Rβγc) és nagy affinitású trimerek (IL-2/15Rαβγc) is létrejöhetnek. Intézetünkben korábban kimutatták, hogy a három alegység citokin hiányában is egymás molekuláris közelségében található T sejtek felszínén. A szintézisük utáni sejten belüli asszociációjuk meglétéről vagy hiányáról azonban még nincsenek ismereteink. Kísérleteinkben arra a kérdésre kerestük a választ, hogy a megszintetizált receptorláncok között fellép-e asszociáció a sejten belül a trafficking során vagy csak a sejtfelszínre kikerülve lépnek egymással kölcsönhatásba?

Fluoreszcens fehérjékkel fuzionált alegységeket kifejező plazmidokat ko-transzfektáltunk HeLa sejtekbe, majd konfokális mikroszkóppal vizsgáltuk a fehérjék közötti kölcsönhatásokat. Az intracelluláris organellumok azonosítására specifikusan az endoplazmatikus retikulumban, illetve a Golgiban kifejeződő fehérjét kódoló konstruktokat szintén bejuttattunk a sejtekbe. Intenzitásalapú fluoreszcencia rezonancia energiatranszfer (FRET) méréseink alapján minden megvizsgált esetben tapasztalható volt asszociáció, az ER-ben és a Golgi-ban is, ami azonban nagyon nehezen kimutatható (kis transzferhatásfokkal jellemezhető), ezért megfigyeléseinket további kísérletekkel erősítjük meg. Az egyes alegységek különböző méretű extracelluláris-, transzmembrán- és intracelluláris doménekből állnak. A leghosszabb intracelluláris résszel rendelkező (β) láncot rövidítve végzünk további méréseket. Ezen kívül tervezünk asszociáció vizsgálatot citokinkezelést követően a sejtmembrán lipid tutajaiban és azokon kívül.