Monocyter leukémiás sejtvonalak prokoaguláns hatásának vizsgálata

Bevezetés: Akut myeloid leukémiákban (AML) a thromboembóliás szövődmények kockázata 5-7-szeres az egészséges populációhoz képest. Ennek hátterében véralvadási fehérjék, pl. szöveti faktor (TF) fokozott expressziója, microvesicula képződés, illetve a kemoterápiás szerek mellékhatásai lehetnek. Az FLT3 (fms-szerű tirozin kináz receptor-3)-ITD mutáció a felnőttkori akut myeloid leukémiák (AML) 20-30 %-ban van jelen és jelenléte rossz prognózisra utal.
Anyagok és módszerek: Kísérleteinkben az FLT3-ITD mutációra vad típusú THP-1, heterozigóta MOLM-13 és a homozigóta MV4-11 sejtvonalakat, továbbá kemoterapeutikumokra (CEP, Sunitinib) rezisztens heterozigóta sejtvonalak prokoaguláns hatását vizsgáltuk. Negatív kontrollként egészséges egyének perifériás véréből izolált monocytákat, pozitív kontrollként egy akut promyelocytás leukémia sejtvonalat (NB4) használtunk. A sejtvonalakat 15%-os FBS-t tartalmazó RPMI-1640 mediumban tenyésztettük. Felszíni foszfatidil-szerin (PS) és TF-expressziójukat áramlási citométerrel vizsgáltuk. A prokoaguláns hatás mértékét funkcionális thrombin generációs teszt (TGT) segítségével állapítottuk meg. A sejtes rendszerek vizsgálatában maga az aktivált sejt indítja el a thrombin képződést, mely a thrombin generációhoz tartozó idő paraméterek (lagtime, time to peak) segítségével értékelhető a legjobban.
Eredmények: A sejtvonalak PS-expressziója nem különbözik (1%), míg a THP-1 sejtvonal mutatja a legmagasabb TF-expressziót (73%), melyet az MV4-11 (21%) és MOLM-13 (4%) követ. Normál humán monocytákhoz (lagtime: 15 perc) viszonyítva mindhárom sejtvonal szignifikánsan gyorsabb thrombin generációt mutat (lagtime: THP-1: 4,8, MOLM-13: 5,4, MV4-11: 4,5 perc). A rezisztens sejtek lassabban képeznek thrombint, mint a nem rezisztens MOLM-13 sejtvonal. Monocytákhoz viszonyítva a monocyter leukémiás sejtvonalak peak thrombin és ETP paraméterei nem térnek el szignifikánsan.
Következtetés: A monocyter leukémiás sejtvonalak fokozott prokoaguláns hatással rendelkeznek normál monocytákhoz képest, azonban az FLT3-ITD mutáció státusz ezt nem befolyásolja jelentősen. A rezisztens sejtek thrombin generációja kisebb mértékű, mint a szenzitív MOLM-13 sejtvonalé.