Egy CD14/Fc fúziós fehérje kötődése baktériumokhoz

Egyes patogén baktériumok antibiotikum rezisztenciájának széleskörű elterjedésével fokozódik az igény olyan új antimikrobiális szerek fejlesztése iránt, melyek hatásmechanizmusukban jelentősen különböznek a jelenleg használt antibiotikumoktól. Az egyik irány olyan fúziós fehérjék - tulajdonképpen mesterséges antitestek - létrehozása, melyekben egy mintázatfelismerő receptort fúzionáltatnak a humán IgG Fc részéhez. Munkánk során egy CD14/Fc fúziós fehérjét hoztunk létre, mely a CD14 segítségével kórokozók széles spektrumához kötődik. A kötődés vizsgálatát áramlási citométerrel végeztünk. Fluoreszcensen jelölt baktérium preparátumokat készítettünk, és egy Fc rész ellenes fluoreszcensen jelölt antitest segítségével vizsgáltuk a fúziós fehérje kötődését a különböző baktériumokhoz. Kimutattuk, hogy a CD14/Fc fúziós fehérje valamennyi általunk tesztelt (n=6) Gram-negatív baktériumhoz kötődik, különösen a rövid LPS mutánsokhoz. Ezen mutánsok LPS-éről hiányzik a poliszacharid oldallánc egy része, hozzáférhetővé téve ezáltal a rendkívül konzervatív lipid A részt. A baktériumokhoz való kötődés LPS kötő fehérje (LBP) függőnek bizonyult, ami arra utal, hogy a baktérium-CD14/Fc interakció LPS-CD14 specifikus. A kötődés specifikusságát további kísérletekkel igazoltuk, melyekben nagy koncentrációjú LPS, illetve blokkoló anti-CD14-antitest segítségével gátoltuk a CD14/Fc fúziós fehérje baktériumokhoz való kötődését. Ezek a kísérletek alátámasztották, hogy a CD14/Fc fúziós fehérje LPS-CD14 specifikus módon kötődik a vizsgált baktériumokhoz. A Gram-negatív baktériumokon kívül a fúziós fehérje a két vizsgált Gram-pozitív baktérium közül a Listeria monocytogenes-hez is kötődött. A kísérleteinkben bizonyítottuk, hogy a CD14/Fc molekula kórokozók széles spektrumához kötődik, ami az első lépése a fehérje esetleges immunológiai funkciói leírásának.