Glucagon típusú peptid (GLP-1) meghatározására szolgáló radioimmunassay (RIA) módszer kifejlesztése és alkalmazása

A glucagon típusú peptid-1 (GLP-1) a vékonybél L-sejtjeiben képződik a proglucagon enzimatikus hasadása során. A peptidhormon direkt és indirekt úton is hatással van a szervezet cukor háztartására, ezáltal fontos és tanulmányozandó faktor az obezitás és cukorbetegség mechanizmusának tanulmányozásban.
Célunk egy érzékeny és specifikus GLP-1 RIA módszer kifejlesztése volt, amelynek segítségével vizsgálni tudjuk a peptid biológiai szerepét.
A RIA módszer kifejlesztése során használt C-terminális érzékenységű antiszérumot nyulak immunizálásával termeltettük GLP-1 (19-37) - marha szérum albumin (BSA) antigén szubkután adásával. Az antitest kötődésének kimutatrására iodogénes módszerrel, 125I izotóppal jelölt GLP-1 (19-37)-et használtunk. A kötődés számszerűsítéséhez a jelöletlen GLP-1 (19-37) peptidet használtunk a 0-1000 fmol/ml közötti koncentráció tartományban. RIA módszerünk alkalmazásaként plazma GLP-1 koncentráció meghatározásokat végeztünk atípusos antipszichotikum okozta elhízás és inzulin rezisztencia patkány modellben. A kísérlet során Sprague-Dawley patkányokat 28 napig per os olanzapinnal (5 mg/kg/nap), a kontroll csoportot oldószerrel kezeltük.
Eredményeink szerint, tíz egymást követő mérés során a kalibrációs görbe D50 értéke 15,18±2,02 fmol/ml-nek adódott. Az intra-assay variációs koefficiens 6,34 %, az inter-assay variációs koefficiens 9,19 % volt. Módszerünk kimutatási határa: 0,4 fmol/ml GLP-1. RIA módszerünknél alkalmazott antiszérum csak jelentéktelen mértékű keresztreakciót adott a hasonló szerkezetű más peptidekkel. Az olanzapinnal kezelt állatokban az éhgyomri GLP-1 szint nem tért el szignifikánsan az oldószerrel kezelt csoporttól, azonban a glükóz terhelés hatására az olanzapinnal kezelt csoportban szignifikánsan kevesebb GLP-1 szabadult fel, mint a kontroll csoportban.
Következtetés: A kifejlesztett GLP-1 RIA módszerünk nagy érzékenységű és peptid specifikus. Alkalmas arra, hogy szöveti és plazma koncentráció meghatározásokat végezzünk vele, amelynek segítségével a peptidhormon további biológiai szerepéről fontos információk nyerhetők. Krónikus olanzapin kezeléskor fellépő glükóz intolerancia oka részben a csökkent GLP-1 felszabadulás.