HOFI knock out és vadtípusú egércsontvelői eredetű makrofágok IFN-gamma válaszainak vizsgálata

A HOFI [SH3PXD2B, fad49, Tks4] fehérje az src tirozin kináz célfehérjék családjába tartozik, amely magas szinten expresszálódik primer makrofágokban, valamint dendritikus sejtekben. Emberben a HOFI fehérje kifejeződésének hiánya felelős a Frank-ter-Haar szindróma kialakulásáért. A nee egértörzsben, amely a HOFI természetes „knock-out”-ja, a csontok abnormális fejlődése figyelhető meg. Ez törpenövésben, craniofaciális és más csontvázrendszeri fejlődési zavarok formájában jelentkezik. A nee egerekben ezen kívül halláskárosodás, glaukóma, valamint a fehér zsírszövet hiánya is megfigyelhető. Visszatérően jelentkezik a középfül gyulladása, amit a koponyafejlődési rendellenességekkel hoztak összefüggésbe. A HOFI fehérje biológiai funkciói közül a legjobban a podoszómák létrejöttében és működésében betöltött szerepe bizonyított, de nemrégiben publikált eredmények szerint tumoros sejtekben részt vehet a reaktív oxigén gyökök (ROS) termelésének szabályozásában is. Ez utóbbi megfigyelés alapján kísérleteinkben HOFI deficiens és vad típusú egerek csontvelő-eredetű makrofágjainak ROS-termelő képességét hasonlítottuk össze. Ehhez az egerek femurjaiból, illetve tibiáiból csontvelői fagocita prekurzor sejteket izoláltunk. Háromnapi CMG14-12 kondícionált médiumban való tenyésztést követően, a prekurzor sejtek érett makrofágokká differenciálódtak. A makrofágok aktiválásához 2 napig tenyésztettük őket lipopoliszacharid (LPS) jelenlétében. Az intracelluláris ROS szintek méréséhez a sejteket egy redox-szenzitív fluoreszcens festékkel (2’-7’-dihidro-diklorofluorescein diacetát, H2DCFDA) töltöttük meg. A fölösleges festék eltávolítását követően, a sejteket IFN-gammával kezeltük. Eredményeink szerint, a HOFI deficiens egér eredetű makrofágok szignifikánsan kevesebb ROS-t termeltek IFN-gamma stimulus hatására, mint a vad típusú egerekből származó makrofágok. A makrofágok általunk megfigyelt károsodott ROS termelése szerepet játszhat a HOFI deficiens egerekben az otitis media gyakori előfordulásában.