Alpha-2 plazmin inhibitor-fibrinogén komplex mennyiségének meghatározása humán plazmában

Az α2-plazmin inhibítor (α2-PI) 67 kDa, egyláncú glycoprotein, melynek fő feladata a fibrinolízis gátlása. Gátló hatását két módon fejti ki: 1)a képződő szabad plazminnal gyors, irreverzibilis komplexet képez (PAP komplex); 2)az aktivált XIII-as faktor (FXIIIa) az α2-PI-t a fibrin α-láncához kereszt köti, ezáltal az α2-PI-t az alvadékba lokalizálja.
Ellentmondó adatokat közöltek arról, hogy az α2-PI a plazmában szabadon vagy fibrinogénhez kötve található.
Munkacsoportunk korábbi kísérletei során humán plazmából az α2-PI-t és a hozzá kötődött molekulákat Sepharose 4B gélhez kötött α2-PI-specifikus monoklonális antitest segítségével kivontuk, majd Western blotting technikával azonosítottuk a kivont fehérjéket. Az immunprecipitátumokban kovalens módon kereszt kötött α2-PI-fibrinogén komplex nem, de a fibrinogén jól detektálható mennyiségben jelen volt. Az eredmények alapján megállapítottuk, hogy az α2-PI normál plazmában nincs kovalensen fibrinogénhez kötve, de egy része nem kovalens módon fibrinogénhez kötve keringhet.
Jelen munkánk során célunk a plazmában keringő α2-PI-fibrinogén komplex mennyiségének meghatározása volt.
Sepharose 4B gélhez kötött α2-PI-specifikus monoklonális antitest segítségével 20 egészséges véradó citráttal alvadásgátolt plazmájából kivontuk az α2-PI-fibrinogén komplexet, majd a gélről leeluált α2-PI és fibrinogén koncentrációját α2-PI ill. fibrinogén ELISA módszerekkel meghatároztuk.
Eredményeink szerint normál plazmában az α2-PI-nek csak elenyésző része kötődik fibrinogénhez, vagy a kötődés nagyon gyenge, hiszen az immunprecipitáció során 175±16.4 nM α2-PI csak 1.04±1.17 nM fibrinogént vitt magával. Amennyiben a plazmához trombint és Ca2+-ot adtunk és a képződő fibrin polimerizációját GPRP peptid, a FXIII aktivitását pedig jódacetamid hozzáadásával meggátoltuk, az 1 nM α2-PI-re jutó fibrinogén/szolubilis fibrin mennyisége 20-szorosára emelkedett az immunprecipitátumban (91±12 nM α2-PI /11±3 nM fibrinogén).
Eredményeink alapján az α2-PI a normál plazmában a fibrinogénhez nem vagy csak nagyon gyenge nem kovalens kötéssel kapcsolódik, a fibrinné való átalakulás a kötődést nagy mértékben fokozza.