RAR és RXR kölcsönhatásainak vizsgálata modern biofizikai módszerekkel

A magreceptorok szupercsaládjába olyan fehérjék tartoznak, amelyek ligandfüggő módon képesek szabályozni célgénjeik kifejeződését. Kutatásunk során a retinoid receptorok családjába tartozó reténsav receptor (RAR) és retinoid X receptor (RXR) kölcsönhatásait vizsgáljuk élő sejtekben. Ezek a receptorok ligand hiányában DNS-hez kapcsolódva korepresszor komplexet kötnek és gátolják célgénjeik kifejeződését. A működésüket leíró modell szerint agonista ligand hatására (az A vitamin származékai) a receptorok konformációváltozáson mennek keresztül, melynek során koregulátor csere történik és a korepresszor komplex aktivátor komplexre cserélődik. Ezt a modellt a területen zajló intenzív kutatások eredményeképp egyre dinamikusabb kép kezdi felváltani. Vizsgálataink során arra voltunk kíváncsiak, hogy ligandkezelés hatására hogyan változik a receptorok egymáshoz és a kromatinhoz való affinitása.
Ennek eldöntésére HeLa sejteket transzfektáltunk fluoreszcensen jelölt RXR és RAR magreceptorokkal. A mobilitásban bekövetkező változásokat fluoreszcencia korrelációs spektroszkópiával (FCS), az affinitásban bekövetkező változásokat fluoreszcencia rezonancia energia transzfer (FACS-FRET) segítségével kívántuk megmérni. Mindkét módszer alkalmas arra, hogy az említett tulajdonságok változását élő sejtekben kövessük nyomon.
Eredményeink azt mutatták, hogy a magreceptorok agonista ligandjai a receptorok mobilitását csökkentik és az RAR és RXR kotranszfekciója önmagában is a mobilitás csökkenéséhez vezet, amely valószínűleg a kromatinhoz való megnövekedett affinitásnak a következménye. FRET vizsgálataink továbbá kimutatták, hogy agonista ligand hatására erősödik a heterodimerizáció a két receptor között, azonban az RXR agonistával történő kezelése nem csökkentette szignifikánsan a receptorok mobilitását. Ez arra utal, hogy az RAR-RXR komplex nem permisszív dimert képezve, csak az RAR oldaláról aktiválható.
FRET-el kombinált FCS vizsgálatink egy igen komplex rendszer képét kezdik kirajzolni és megerősítik az RXR központi szerepét a magreceptorok aktivációjában.