Protein foszfatáz Z regulátor fehérjék vizsgálata Candida albicans-ban

A protein foszfatáz Z a szerin/treonin protein foszfatáz enzimcsaládba tartozó gomba specifikus protein foszfatáz, amit az opportunista patogén Candida albicans-ban a CaPPZ1 gén kódol. A gén terméke a CaPpz1 fehérje szerepet játszik a stressz válasz és a gombafonalak (hífa) növekedésének szabályozásában, ezért orvosbiológiai jelentőséggel bír. Munkám célja a foszfatáz regulációjának felderítése. Irodalmi adatok alapján ismeretes volt, hogy Saccharomyces cerevisiae-ben a Hal3 és Vhs3 fehérjék gátolják a foszfatáz Z aktivitását. Ezek a gátló fehérjék a hasonló szerkezetű Cab3 fehérjével együtt részt vesznek a Coenzim A bioszintézisében is. Szekvencia hasonlóság alapján C. albicans-ban két nagyon hasonló fehérjét találtunk amelyeket CaHal3 és CaCab3 névvel láttunk el.
Munkám során fehérje-fehérje interakciós vizsgálatokat végeztem a CaPpz1 és a lehetséges gátló fehérjék közötti kölcsönhatások kimutatására. A glutation-Sepharose 4B gyantához GST-cimkével ellátott rekombináns CaHal3 és CaCab3 fehérjéket kötöttem, majd a gyantát His-cimkével rendelkező CaPpz1 fehérjével inkubáltam. A foszfatáz kikötődését mosás és elúció után Western blot módszerrel detektáltam. Eredményeim szerint mind a CaHal3, mind a CaCab3 képes a CaPPZ1-hez kötődni.
A fehérje kölcsönhatások fiziológiás szerepét hal3 deléciós mutáns S. cerevisiae törzsben tanulmányoztam. Megvizsgáltam, hogy a CaHal3 és CaCab3 fehérjék expressziója hogyan befolyásolja a mutáns életképességét só (LiCl) és sejtfal károsító anyag (Hygromicin B) által kiváltott stressz körülmények között. Azt tapasztaltam, hogy a várakozással ellentétben a CaCab3 fehérje komplementálta az ScHal3 hiányát, míg a szerkezetileg jobban hasonló CaHal3 fehérjének nem volt hatása.
Konklúzióként elmondható, hogy bár az in vitro teszt szerint a C. albicans CaHal3 és CaCab3 fehérjéi egyaránt képesek a CaPpz1 fehérjéhez kötődni in vivo körülmények között csak a CaCab3 bizonyult hatékonynak. Tehát a megvizsgált két gombafajban a foszfatáz regulációját más fehérjék valósítják meg. Munkánkat az OTKA K-108989 pályázat tette lehetővé.