Az antibiotikum termelés és differenciálódás folyamatában kulcsfontosságú A-faktor vizsgálata Streptomyces griseusban

A Streptomycesek Gram+, spórákkal szaporodó fonalas baktériumok, amelyek kiemelkedő egészségügyi jelentőségre tettek szert, mivel a jelenleg forgalomban lévő antibiotikumok közel 80 %-a tenyészeteikből származik. Az utóbbi 30 évben leírt antibiotikumok csekély száma és a rezisztencia rohamos terjedése miatt egyre nagyobb az igény új típusú antibiotikumokra, mely kutatásoknak a Streptomycesek kiemelkedő célpontjai. Az antibiotikum termelés szabályozásában egy többkomponensű rendszer vesz részt ezen baktériumokban, melyek közül kiemelendő az extracelluláris autregulátor molekulák szerepe, mint pl. a S. griseusban működő A-faktoré. Korábbi vizsgálatok kimutatták, hogy az A-faktor termelésére nem képes S. griseus B2682-AFN törzsben az ezen molekula bioszintézisében kulcsfontosságú afsA gén funkcióképes és transzkripcióra is kerül. Munkánk során célul tűztük ki az AFN törzs alapos fenotípusos jellemzése mellett az afsA transzlációjának vizsgálatát. Az A-faktor hiánya e törzs esetében az antibiotikum termelés elmaradása mellett együtt járt az extracelluláris proteáz és légmicélium képzés defektusával. Érdekes módon spórák képződése megfigyelhető volt, melyek valószínűsíthetően a szubsztrát micéliumból származtak. Munkánk második szakaszában megvizsgáltuk, hogy az AFN A-faktor termelésében megmutatkozó zavara az AfsA fehérje hiányával magyarázható-e. Ennek érdekében kidolgoztunk egy olyan, E. colin alapuló heterológ expressziós rendszert, amely az AfsA fehérjét GST fúziós formájában termeli. Az AfsA-GST fúziós fehérjét glutation gyöngyök segítségével tisztítottuk, majd a GST farkat trombinnal eltávolítottuk. Az AfsA, illetve AfsA-GST fehérjék ellen poliklonális antitesteket termeltettünk. Ezen antitestek felhasználásával, Western blot segítségével sikerült kimutatnunk az AfsA fehérje jelenlétét nemcsak a S. griseus vad típusú, hanem az AFN törzsben is. Ez arra utal, hogy bár az AfsA szerepe kulcsfontosságú az A-faktor bioszintézisében, de annak megléte nem elégséges feltétele az A-faktor termelés képességének. Egyben azt is feltételezi, hogy az A-faktor termelés nem az afsA gén expressziójánk regulációján keresztül szabályozódik.