Bevezetés: A mikroRNS-ek (miR) jelentős szerepet töltenek be számos betegség patomechanizmusában különböző gének expressziójának szabályozásán keresztül. A vérlemezkék alapvető funkciót töltenek be a hemosztázisban, ugyanakkor súlyos gyulladásos környezetben (szepszis) aktiválódhatnak, ami trombotikus szövődmények kialakulásához vezethet.
Célkitűzés: A thrombocyta aktivációt reguláló molekuláris mechanizmusok nem egészében ismertek, ezért célul tűztük ki a vérlemezke-eredetű miR-ek vizsgálatát szepszisben és kontroll egyénekben. Megvizsgáltuk, hogy milyen összefüggés van a thrombocyta aktiváció mértéke és az egyes miR-ek expressziós szintje között.
Módszerek: 20 szeptikus beteg és 24 egészséges kontroll személy fehérvérsejt depletált vérlemezke mintáiban vizsgáltuk a miR expressziót. A leukocyták eltávolításához CD45 ellenes antitesttel bevont mágneses gyöngyöket (Invitrogen) használtunk, majd totál RNS-t izoláltunk. Első lépésként mindkét csoportból random módon kiválasztottunk 3-3 RNS mintát és TaqMan Open Array-vel (ABI) analizáltunk 754-féle miR-t. Az egyik legnagyobb eltérést mutató miR-26b expresszióját UPL próba alapú RT-qPCR (Roche) módszerrel, míg annak target mRNS (SELP) mennyiségét SYBR Green Kit felhasználásával határoztuk meg. Normalizálásra az RNU43, valamint a 36B4 referenciagéneket használtuk. A thrombocyták aktivációs állapotát a felszíni P-szelektin pozitivitáson keresztül vizsgáltuk áramlási citometriával (FC-500).
Eredmények: A betegekben jelentősen emelkedett a P-szelektin expresszió mértéke (6,5 [4,2-9,5] vs. 1,5 [1,1-2,4] %; p<0,001) a kontrollokhoz képest. Az Open Array analízissel 407 miR-t detektáltunk, melyből 66 több mint kétszeres csökkenést, míg másik 37 ugyanolyan mértékű emelkedést mutatott szepszisben. A teljes betegcsoportban szignifikánsan csökkent a miR-26b relatív szintje szemben a kontrollokkal (553 [296-786] vs. 863 [514-1723]; p=0,015). A miR-26b szabályozta P-szelektin gén mRNS mennyisége szignifikánsan emelkedett volt a szeptikus betegekben (70 [57,4-78,6] vs. 11,1 [5,9-15,4]; p<0,001).
Konklúzió: Szepszisben a csökkent thrombocyta miR-26b fokozott P-szelektin expresszióhoz és ezáltal kóros vérlemezke aktivációhoz vezethet.