Célzott daganatellenes antitestkezelések in vitro vizsgálati módszerei

A daganatellenes kutatások egyik fő területe az antitesteken alapuló terápia. A daganat-specifikus antigéneket felismerő monoklonális antitestek hatásmechanizmusának része a direkt proliferációt gátló hatás, a citotoxikus anyagok célba juttatása és az NK sejteken alapuló antitest-függő sejtes citotoxicitás (ADCC).
Munkánk célja a proliferáció gátlás és citotoxicitás vizsgálatához MTT alapú kolorimetriás esszé, az ADCC in vitro méréséhez impedancia alapú sejtanalizátoron alapuló módszer beállítása.
Kísérleteink során ErbB2-t kifejező, trastuzumab szenzitív SKBR-3 és rezisztens JIMT-1 emlőtumor sejtvonalakat, illetve humán NK-92 sejtvonalat használtunk. Az ErbB2 ellenes antitestek és a citotoxikus emtanzinnal konjugált trastuzumab antigén felismerő tulajdonságát fluoreszcens jelöléssel, áramlási citométeres méréssel igazoltuk.
A kolorimetriás esszé során a metabolikusan aktív sejtek az MTT-t formazánná alakítják, ami abszorpcióváltozást okoz. 96-lyukú tenyésztőedényben az esszé több párhuzamos mintával kivitelezhető. Az abszorpcióból a minták sejtszáma is becsülhető. Az ErbB2 ellenes antitestek az SKBR-3 sejtek proliferációját csökkentették, a rezisztens JIMT-1 sejtek proliferációja nem változott. A trastuzumab-emtanzin az SKBR-3 sejtek proliferációját tovább csökkentette. Végpontos esszé lévén a kezelés kinetikája nem vizsgálható.
Az ECIS Z Theta impedancia alapú sejtanalizátorban a sejtek a speciális tenyésztőedény alján elhelyezett mikroelektródára letapadva az elektródákon mért ellenállást megváltoztatják. A mérés során a plate inkubátorban tartható, a mérés nem befolyásolja a sejteket, így folyamatos mérésre van lehetőség. A proliferációs kísérletek során az MTT alapú tesztnek megfelelő eredményt kaptuk. Mivel az NK sejtek nem letapadó sejtek, önmagukban kevéssé befolyásolják az impedanciát, antitestekkel adva viszont az ADCC által csökkentették a mért impedanciát, azaz az élő, letapadt JIMT-1 sejtek számát.
A megismert és beállított módszerekkel a továbbiakban passzív és aktív daganatellenes immunterápiák hatékonyságát kívánjuk vizsgálni.