Az RNase7/Fc fúziós fehérje - egy új mesterséges opszonin

Bevezetés: Az elmúlt évtizedekben az antibiotikum rezisztencia elterjedése globális méretű problémává vált, a rezisztens kórokozók ellen nyújtott kezelési lehetőségek egyre inkább kimerülőben vannak. Az antimikrobiális kutatások új irányvonalát jelenthetik a PRR/Fc fúziós proteinek létrehozása. Ezek a mintázatfelismerő receptor (PRR) doménnal rendelkező, a humán IgG1 Fc részével fuzionáltatott mesterséges antitestek képesek felismerni a patogének konzervatív struktúráit, és opszoninként működve immunológiai funkciókat modulálhatnak. Munkacsoportunk egy RNase7/Fc fúziós fehérjét hozott létre, és ennek vizsgáltuk meg a biológiai aktivitását.
Módszerek: Az új fúziós fehérje tesztelése során először kötődési vizsgálatokat végeztünk. Különböző baktériumokat inkubáltunk az RNase7/Fc fúziós proteinnel, majd egy fluoreszcensen jelölt (PE) anti-humán IgG antitesttel vizsgáltuk a kötődés mértékét áramlási citométer segítségével. Egy másik kísérlet során az opszonizált baktériumokhoz Protein A/G-sepharose beadeket adtunk és fluoreszcens mikroszkóp alatt vizsgáltuk a gyöngyökhöz kötődött baktériumokat. Az RNase7/Fc opszonizáló hatását áramlási citometriás fagocitózis kísérletekkel vizsgáltuk, FITC-cel jelölt baktériumokat és makrofágokat, dendritikus sejteket és perifériás vérből izolált neutrofil granulocitákat tesztelve. A baktériumok internalizációját konfokális pásztázó lézer mikroszkóppal ellenőriztük.
Eredmények: Az RNase7/Fc fehérje a Gram-negatív baktériumokhoz kötődött erősen, különösen a rövid LPS (Re) mutánsok esetében, és jellegzetes koncentráció és inkubációs idő függést mutatott. A maximális kötődés 5-10 µg/ml RNase7/Fc és 2-4 óra inkubálás után jelentkezett. A fúziós fehérje kötődése a Gram-negatív baktériumokhoz gátolható volt LPS-sel, de peptidoglikán vagy muramil-dipeptid molekulákkal nem. Az opszonizált baktériumok jól kötődtek a Protein A/G-sepharose beadekhez is. A fagocitózis kísérletek során az RNase7/Fc fokozta a Gram-negatív baktériumok fagocitózisát és internalizációját a vizsgált sejtek esetében.
Következtetések: Az expresszált RNase7/Fc fúziós fehérje opszoninként viselkedik, kötődik Gram-negatív baktériumokhoz, és fokozza azok fagocitózisát.