Egy gammaretrovírus proteáz gátolhatóságának vizsgálata

A xenotropic murine leukemia virus-related virus (XMRV) egy humán eredetű újonnan azonosított gammaretrovírus, melyről feltételezhető, hogy kapcsolatban áll a chronikus fáradtság szindrómával (CFS) valamint a prosztata carcinomával. Bizonyos tanulmányok a CFS-ban szenvedő betegek 50-67%-ában, míg az egészséges kontroll csoportok kb. 3,7%-ában mutatták ki az XMRV-t, míg más tanulmányoknak nem sikerült kimutatniuk a vírust CFS-es betegek esetében sem. Ezért további kutatások szükségesek annak kiderítése érdekében, hogy az XMRV valóban etiológiai faktora-e ezeknek a betegségeknek. Az azonban már bizonyított, hogy az XMRV képes a széles körben elterjedt murine leukemia virus (MLV)-alapú vektorok „helper vírusaként” működni, így fennáll annak a veszélye, hogy a génterápiás vektor kijutva a célsejtekből bejut más sejtekbe vagy szélsőséges esetben a humán populációba is. Ezért indokoltnak tűnik az XMRV lehetséges terápiás célpontjainak a felderítése. Mint minden retrovírus, így az XMRV életciklusában is kulcsszerepet tölt be a virális proteáz (PR), mely a virális prekurzor fehérjék funkcionális részekre történő hasítását végzi. Munkánk során célul tűztük ki néhány, a HIV-1 proteáz ellen kifejlesztett PR-inhibitor, az Amprenavir és TL-3 gátló hatásának vizsgálatát az XMRV proteázon. A vizsgált enzimet egy Egyesült Államokbeli kutató csoport tisztított formában bocsátotta a rendelkezésünkre. Kísérleteink során a természetes hasítási helyet tartalmazó MLV p12 fehérjét és egy szintetikus oligopeptidet használtunk szubsztrátként. A szintetikus szubsztrát valamint a hasítási termékek elválasztását, mennyiségi meghatározását valamint az enzim kinetikai vizsgálatát HPLC-s módszerrel végeztük. Kinetikai vizsgálataink azt mutatták, hogy az Amprenavir jelentősen hatékonyabban gátolta az enzim hasítási képességét, mint a TL-3, fehérje szubsztrát hasításási kísérleteink is ugyanezt az eredményt támasztották alá.