Printer-friendly version

A protein foszfatáz 2A (PP2A) holoenzim egy katalitikus alegységből és egy állandó A regulátor alegységből álló dimerből épül fel, amelyhez változatos B (B, B’, B”) regulátor alegységek egyike kapcsolódhat. A változó B alegységek határozzák meg a PP2A szubsztrátspecificitását és sejten belüli lokalizációját. A PP2A az állatok sejtciklusának fontos regulátora.
A növények sejtciklusának szabályozása és ebben a PP2A szerepe kevéssé ismert. A lucerna PP2A B” regulátor alegysége élesztő kéthibrid-rendszerben erős és szelektív kölcsönhatásba lépett a lucerna MsRBR és a rizs OsRBR1 retinoblasztóma-homológ fehérjével (Lendvai és mtsai, 2007). Ezért indokoltnak látszott, hogy tovább vizsgáljuk a PP2A B” alegység szerepét a sejtciklus szabályozásában. Ennek érdekében a rizs PP2A B” alegységet hexahisztidin-fúziós fehérjeként expresszáltuk E. coli baktériumban, és Ni2+-agaróz kromatográfiával tisztítottuk. A rekombináns fehérje ellen poliklonális ellenanyagot termeltettünk nyúlban. Az antiszérumot affinitáskromatográfiával tisztítottuk, és dot blot, valamint Western blot kísérletekben ellenőriztük. Az ellenanyag a PP2A B” fehérjének megfelelő molekulatömegű proteint ismer fel rizs szuszpenziós sejtek és levelek kivonatában, és lehetőséget ad az expresszió szintjének megállapítására rizs PP2A B” fehérjét termelő transzgenikus dohány növényekben. A továbbiakban az antitestekkel végzett immunprecipitációs kísérletek segítségével a PP2A B” alegységgel kölcsönhatásba lépő fehérjék azonosítását tervezzük.