Printer-friendly version

Bevezetés. A cystás fibrosis (CF) az egyik leggyakoribb, a szervezet exocrin mirigyeit érintő súlyos genetikai betegség. Modern diagnosztikája molekuláris genetikai, de megnehezíti a számos igen ritka mutáció. Irodalmi adatok szerint a kaukázusi népcsoportban a deltaF508 mutáció áll leggyakrabban a betegség hátterében. Célunk a korábban multiplex mutáció detektáló kitekkel vizsgált kelet-magyarországi betegek mutációspektrumának DNS szekvenálással történő felmérése volt.
Anyag és módszer. A CFTR gén mind a 27 exonját vizsgáltuk. 30 PCR reakciót optimalizáltunk irodalmi és saját tervezésű primerekkel. Az optimalizált reakciókkal vizsgáltuk az olyan betegek mintáit, akik esetében a multiplex mutáció detektáló módszerek nem mutatták ki a teljes genetikai hátteret.
Eredmények. Az összes PCR reakció működött a 3 hibridizációs hőmérséklet (50-55-60 °C) valamelyikén. Két esetben volt szükség betain hozzáadására, míg egy esetben nagyobb mennyiségű (15 pmol/reakció) oligonukleotid felhasználására. Az optimalizált rendszerrel beteg mintákon végzett analízis minden esetben felderítette a cystás fibrosis molekuláris hátterét. A detektált mutációk (L101X, Q220X, S466X, E831X, Y1092X) minden esetben 'stop' kodon beépülésével járnak és ezért patogéneknek tekinthetők.
Következtetés. A CFTR gén direkt szekvenálása rutin molekuláris genetikai diagnosztikai lehetőséggé vált. A gén exonjainak amplifikálása egyszerű, a kialakított protokoll szerint 3 csoportban elvégezhető. A DNS szekvenálás során a genetikai háttér felderítésével közelebb került a CFTR gén mutációk magyarországi előfordulásának felmérése.