Lehetséges makrofág specifikus PPARg co-regulátorok feltérképezése

Printer-friendly versionPrinter-friendly version
Conference: 
2012/2013. tanév
Session: 
Biochemistry
Presenting author
Name (format for foreign students: Last Name, First Name): 
Nótár Balázs

Abstract data

Előadás címe: 
Lehetséges makrofág specifikus PPARg co-regulátorok feltérképezése
Abstract: 

A peroxiszóma proliferátor aktivált receptor (PPAR)g egy olyan lipid érzékelő transzkripciós faktor mely a lipid metabolizmus és az immunrendszerhez szabályozásában egyaránt részt vesz. A makrofágok olyan immunsejtek, melyek a környezetükben jelen lévő citokinek minőségétől (pl. gyulladásos választ kiváltó vagy gyulladásos folyamatokat gátló) függően eltérő funkciót tölthetnek be, valamint képesek a lipid molekulákat bekebelezni és ezeket a lipid-jeleket a PPARg receptor közvetítésével génkifejeződéssé „fordítani”.
Adipocitákban, azaz zsírsejtekben a PPARg transzkripciós aktivitását a CEBP/B transzkripciós faktor szabályozza. Feltételeztük, hogy makrofágokban a PPARg sejtspecifikus funkcióját szintén kofaktor(ok) szabályozzák. Célunk ilyen kofaktorok azonosítása volt egy array alapú PamCHIP technológiával detektált kofaktor lista alapján, melynek előállításához rekombináns PPARg ligand kötő domént inkubáltak 155, szilárd fázishoz kötött, LXXLL vagy LXXXIXXXL nukleáris receptor kötő motívumot tartalmazó peptiddel és ezek kölcsönhatását fluoreszcens alapú módszerrel mérték. Korábbi kísérletekből származó microarray eredményeinket összevetettük ezzel a listával, és így 14 olyan lehetséges koregulátort találtunk, melyek makrofágokban mRNS szinten kifejeződnek.
A jelen munkában a fent leírt listából a Ligand dependent Nuclear Receptor Co-repressor (LCOR) molekulát választottuk a PPARg-val létrejövő feltételezett kölcsönhatás igazolásához. Kísérleteinkben HEK 293T/AD sejteket és emlős kettős-hibrid rendszert használtunk. A GAL4-DBD-LCOR konstrukciókhoz az LCOR molekula teljes hosszúságú vad típusú ill. mutáns (LXXL mutáns LCOR-LSKAA és egyéb szabályozó régiók deléciójával előállított (LCOR-M1M2)) formáit illetve az LCOR rövidebb, csak az LXXLL ill. LXXLL és egyéb szabályozó motívumokat tartalmazó variánsait használtuk. A fehérjék kifejeződését Western blot analízissel ellenőriztük. Eredményeink szerint az LCOR nem lép interakcióba a PPARg-val HEK 293T/AD sejtekben.
További kísérletek során más lehetséges kofaktorok azonosítását tervezzük.

First tutor
Name: 
Dr. Nagy Zsuzsanna
Department: 
Biokémiai és Molekuláris Biológiai Intézet

Támogatók: Támogatók: Az NTP-TDK-14-0007 számú, A Debreceni Egyetem ÁOK TDK tevékenység népszerűsítése helyi konferencia keretében, az NTP-TDK-14-0006 számú, A Debreceni Egyetem Népegészségügyi Karán folyó Tudományos Diákköri kutatások támogatása, NTP-HHTDK-15-0011-es A Debreceni Egyetem ÁOK TDK tevékenység népszerűsítése 2016. évi helyi konferencia keretében, valamint a NTP-HHTDK-15-0057-es számú, A Debreceni Egyetem Népegészségügyi Karán folyó Tudományos Diákköri kutatások támogatása című pályázatokhoz kapcsolódóan az Emberi Erőforrás Támogatáskezelő, az Emberi Erőforrások Minisztériuma, az Oktatáskutató és Fejlesztő Intézet és a Nemzeti Tehetség Program