HIV-1 mutáns kapszid fehérje tisztítása és in vitro karakterizálása

Egy mutáns HIV-1 kapszid fehérje tisztítása és „in vitro” karakterizálása

A HIV-1 kapszid fehérje „in vitro” körülmények között a virális proteáz szubsztrátja. Az endocitotikus útvonalon a sejtbe bejutó vírus tartalmazza az aktív proteázt, aminek aktivitását tovább növeli az endoszóma savas pH-ja. A virális proteinek proteáz általi hasítása (beleértve a kapszid fehérjét) fontos lehet a működőképes preintegrációs komplex kialakulásához a fertőzés korai szakaszában. Eddigi vizsgálataink azt mutatták, hogy a kapszid fehérjében található elsődleges hasítási helyek általunk létrehozott mutációi nagymértékben megváltoztatták a fehérje másodlagos szerkezetét. Továbbá ezek a fehérjék elvesztették azt a képességüket, hogy kötődjenek a humán peptidil-prolil izomeráz, a ciklofilin A (CypA) fehérjéhez. A CypA jelenléte elengedhetetlen az érett, fertőzőképes virionok kialakulásához, így a kötődés gyengülése illetve megszűnése hozzájárulhat az ilyen módosított kapszid fehérjéből felépülő virionok korábban megfigyelt fertőzőképességének csökkenéshez. Ebben a tanulmányban a kapszid fehérjében korábban azonosított másodlagos hasító helyek egyikének mutációját vizsgáltuk.
Munkánk során egy hisztidin farokkal rendelkező rekombináns kapszid fehérjével dolgoztunk, amelyben a Leucin 205-ös aminosavrészt alaninra cseréltük azért, hogy a mutáció proteolitikus hasításra és CypA kötésre kifejtett hatását vizsgálhassuk „in vitro” körülmények között. Megállapítottuk, hogy a kapszid fehérje virális proteáz általi hasítása csökkent az aminosav csere hatására. További vizsgálataink azt is igazolták, hogy a fehérje CypA-kötő képessége is csökkent, ami – korábbi vizsgálataink alapján - arra utal, hogy ezen mutációt tartalmazó fehérjéből felépülő virionok fertőzőképessége is nagymértékben csökkenni fog.