Apoptotikus és nekrotikus sejtek fagocitózisának detektálása áramlási citométerrel

Az apoptotikus és nekrotikus sejtek gyors eltávolítása az ép szövetekből nagyon lényeges szerepet kap az egészség és a homeosztázis fenntartásában. Azok az elhalt sejtek, melyek nem kerülnek eltávolításra a szövetekből, autoantigén forrássá válnak és olyan autoimmun betegségek kialakulásához vezethetnek, mint a szisztémás lupus erythematosus. Ezen folyamatok megelőzésének érdekében, egészséges egyénekben az apoptotikus és nekrotikus sejtek eliminálása nagyon gyors és hatékony mechanizmus. Az apoptotikus sejtek fagocitózisának mechanizmusa ismert, míg a nekrotikus sejtek eltávolításában résztvevő receptorokról és ligandokról kevés adat áll rendelkezésünkre. Annak érdekében, hogy információt nyerjünk a nekrotikus sejtek eltávolításáról, apoptotikus és nekrotikus sejtek fagocitózisát vizsgáltuk áramlási citométerrel.
Kísérleteinkben fagocita sejtekként NMRI egér combcsontból izolált, csontvelői progenitorokból differenciáltatott makrofágokat használtunk. A bekebelezendő apoptotikus és nekrotikus sejteket NB4 promielocitás sejtvonalból hoztunk létre etopoziddal illetve hidrogén-peroxiddal való kezelés következtében. A fagocitózis mértékét áramlási citométerrel vizsgáltuk, melyhez a makrofágokat zöld fluoreszcens CFDA, míg az elhalt sejteket pHrodo Red festékkel jelöltük. A fagocitózis optimális időtartamának meghatározására, az apoptotikus sejtek fagocitózisát különböző időközökig végeztük: 45 perc, 30 perc, 20 perc és 10 perc. A makrofágok festéséhez ideális CFDA koncentrációt szintén optimalizáltuk.
Kísérleteink során beállítottunk egy olyan áramlási citométeren alapuló mérési rendszert, amely lehetővé teszi apoptotikus és nekrotikus sejtek makrofágok általi fagocitózisának gyors és objektív meghatározását.