Apoptotikus és nekrotikus sejtek fagocitózisának detektálása áramlási citométerrel

Printer-friendly versionPrinter-friendly version
Conference: 
2014/2015. tanév
Session: 
Molecular biology
Presenting author
Name (format for foreign students: Last Name, First Name): 
Rácz Evelin Noémi

Abstract data

Előadás címe: 
Apoptotikus és nekrotikus sejtek fagocitózisának detektálása áramlási citométerrel
Abstract: 

Az apoptotikus és nekrotikus sejtek gyors eltávolítása az ép szövetekből nagyon lényeges szerepet kap az egészség és a homeosztázis fenntartásában. Azok az elhalt sejtek, melyek nem kerülnek eltávolításra a szövetekből, autoantigén forrássá válnak és olyan autoimmun betegségek kialakulásához vezethetnek, mint a szisztémás lupus erythematosus. Ezen folyamatok megelőzésének érdekében, egészséges egyénekben az apoptotikus és nekrotikus sejtek eliminálása nagyon gyors és hatékony mechanizmus. Az apoptotikus sejtek fagocitózisának mechanizmusa ismert, míg a nekrotikus sejtek eltávolításában résztvevő receptorokról és ligandokról kevés adat áll rendelkezésünkre. Annak érdekében, hogy információt nyerjünk a nekrotikus sejtek eltávolításáról, apoptotikus és nekrotikus sejtek fagocitózisát vizsgáltuk áramlási citométerrel.
Kísérleteinkben fagocita sejtekként NMRI egér combcsontból izolált, csontvelői progenitorokból differenciáltatott makrofágokat használtunk. A bekebelezendő apoptotikus és nekrotikus sejteket NB4 promielocitás sejtvonalból hoztunk létre etopoziddal illetve hidrogén-peroxiddal való kezelés következtében. A fagocitózis mértékét áramlási citométerrel vizsgáltuk, melyhez a makrofágokat zöld fluoreszcens CFDA, míg az elhalt sejteket pHrodo Red festékkel jelöltük. A fagocitózis optimális időtartamának meghatározására, az apoptotikus sejtek fagocitózisát különböző időközökig végeztük: 45 perc, 30 perc, 20 perc és 10 perc. A makrofágok festéséhez ideális CFDA koncentrációt szintén optimalizáltuk.
Kísérleteink során beállítottunk egy olyan áramlási citométeren alapuló mérési rendszert, amely lehetővé teszi apoptotikus és nekrotikus sejtek makrofágok általi fagocitózisának gyors és objektív meghatározását.

First tutor
Name: 
Dr. Sarang Zsolt
Department: 
Biokémiai és Molekuláris Biológiai Intézet

Támogatók: Támogatók: Az NTP-TDK-14-0007 számú, A Debreceni Egyetem ÁOK TDK tevékenység népszerűsítése helyi konferencia keretében, az NTP-TDK-14-0006 számú, A Debreceni Egyetem Népegészségügyi Karán folyó Tudományos Diákköri kutatások támogatása, NTP-HHTDK-15-0011-es A Debreceni Egyetem ÁOK TDK tevékenység népszerűsítése 2016. évi helyi konferencia keretében, valamint a NTP-HHTDK-15-0057-es számú, A Debreceni Egyetem Népegészségügyi Karán folyó Tudományos Diákköri kutatások támogatása című pályázatokhoz kapcsolódóan az Emberi Erőforrás Támogatáskezelő, az Emberi Erőforrások Minisztériuma, az Oktatáskutató és Fejlesztő Intézet és a Nemzeti Tehetség Program