Ty 1 retrotranszpozon eredetű proteáz vizsgálata

A Ty1 retrotranszpozon Saccharomyces cerevisiae-ben található 5 endogén retrotranszpozon egyike. A retrotranszpozonok 2 egyedi LTR szekvenciát tartalmaznak, amelyek határolnak egy-egy gag és pol ORF-et vagy egy gag-pol ORF-et. Az LTR-t tartalmazó retrotranszpozonok és a retrovírusok hasonlóságot mutatnak a génexpreszióban, replikációban, transzpozícióban és a genom átrendeződésben. A retrotranszpozonok két családba sorolhatóak : a Ty3-gypsy és a Ty1-copia családba. A Ty1-copia család tagjainak pol génje 3 domént kódol: a proteázt, az integrázt és a reverz transzkriptázt. A Ty1 élet-ciklusa a genom elemeinek transzkripciójával kezdődik, majd az mRNS transzlációjával folytatódik, végül a Ty1 proteáz (PR) processzálja az életciklushoz nélkülözhetetlen fehérjéket. Munkánk során egy Ty1Gag-proteáz fúziós fehérje hisztidin C-terminális farokkal ellátott változatát vizsgáltunk. A fehérje expresszió hőmérséklet-függés vizsgálatát követően a fehérjék kinyerését optimalizáltuk majd a termelődőtt fehérjét kromatográfiás technika alkalmazásával tisztítottuk. Az expresszálódott fúziós fehérje processzálódási képességét vizsgáltuk. A processzálódott proteáz aktivitását szintetikus oligopeptid szubsztrát HPLC-s módszer segítségével igazoltuk.