Asprv1 és filaggrin expresszió HaCaT sejtvonal differenciáltatása során

A bőr bazális rétegében található primer sejtek differenciálódásuk során a felsőbb sejtrétegek felé vándorolnak, migrációjuk során biokémiai és morfológiai változásokon mennek keresztül. A biokémiai változások a fehérje expressziós mintázat változásában, míg a morfológiaiak a sejt teljes szerkezetének átalakulásában nyilvánulnak meg. A keratinocitákban differenciálódás és seb regenerálódás során expresszálódó ASPRV1 proteáz (bőr-specifikus retrovirális eredetű aszpartil proteáz 1) természetes szubsztrátja a filaggrin doménekből felépülő profilaggrin prekurzor molekula. A filaggrin fehérje egy szerkezeti fehérje, melyet a bőrben található transzglutaminázok keresztkötnek a keratin tartalmú citoszkeletális vázzal. A prekurzor fehérje filaggrin doménjei közötti összekötő szekvencia hasításáért az ASPRV1 proteáz felelős, a filaggrin további degradációs folyamatok következtében természetes hidratációs faktorokká érik, melyek feladata a bőr hidratációja és a környezeti hatásokkal szembeni védelem.
A HaCaT sejtvonal egy, a humán bőrből származó, spontán immortalizált keratinocita sejtvonal, mely csökkentett Ca2+ koncentrációjú és emelt hőmérsékletű környezetben fenntartható. Vizsgálataink során arra voltunk kíváncsiak, hogy a HaCaT sejtek differenciáltatása során hogyan változik a filaggrin és az ASPRV1 fehérjék expressziója.
A HaCaT sejtek differenciálatlan állapotának fenntartását csökkentett Ca2+ tartalmú (<0,1 mM) tápfolyadékkal értük el. A differenciált állapot létrehozásához magasabb Ca2+ tartalmú (~1,8 mM) tápfolyadékot alkalmaztunk, 11 napos intervallumban. Az irodalomban leírt morfológiai változásokat a mikroszkópos vizsgálatok során tapasztaltuk. A differenciáltatásos kísérlet során detektáltuk a prekurzor profilaggrin expresszióját és filaggrin fehérjék megjelenését. Csökkentet és magas Ca2+ tartalmú tápfolyadékban HaCaT sebzéses kísérletet végeztük 5 napos intervallumban, mellyel a mechanikai sérülés hatását és a sejt regenerálódást vizsgáltuk. Az ASPRV1 fehérje megjelenésével a profilaggrin processzálását és mennyiségének csökkenését várjuk, melynek következtében különböző méretű proteolitikus fragmentek megjelenése várható.