NLRC5 mennyiségi meghatározása célzott tömegspektrometriás módszerrel

Printer-friendly versionPrinter-friendly version
Conference: 
2014/2015. tanév
Session: 
Molecular biology
Presenting author
Name (format for foreign students: Last Name, First Name): 
Székely Tímea

Abstract data

Előadás címe: 
NLRC5 mennyiségi meghatározása célzott tömegspektrometriás módszerrel
Abstract: 

A veleszületett immunrendszer mintázat felismerő receptorai (PRR) kulcsfontosságú szerepet töltenek be a szervezet első védelmi vonalában. Ezen receptorok a patogén-asszociált molekuláris mintázatok felismerésére specializálódtak mind extracelluláris, mind intracelluláris formában. A NOD-like receptor (NLR) család tagjai tipikusan intracellulárisan működnek és patogén mikroorganizmusokat és vírusokat ismernek fel. Az NLR család legnagyobb tagja az NLRC5, amely 1866 aminosavat tartalmaz és legfőképpen vérképző sejtekben (myeloid, limfoid) fejeződik ki. Az NLRC5 szerkezetén belül különböző domének felelősek az oligomerizációért és ezáltal az aktivációért, valamint a downstream jelátvitelért. A vírusellenes immunválasz pozitív és negatív regulátoraként működik megteremtve egy jól szabályozott negatív visszacsatolási mechanizmust. Ezen kívül a fehérje szerepet játszik az inflammaszóma jelátvitel és az MHC I transzkripció szabályozásában is, továbbá szabályozza a MAP- kináz és NF-κB jelátviteli útvonalak működését.

A Selected Reaction Monitoring (SRM) egy rendkívül szelektív és érzékeny tömegspektrometriás vizsgálati módszer. SRM analízisek kivitelezése tripla kvadrupollal rendelkező tömegspektrométereken történik, mely három, sorban elhelyezett tömeganalizátorból áll. Az első kvadrupolba bejuttatott ionok közül csak egy meghatározott m/z arányú prekurzor ion kerül kiválasztásra, mely továbbítódik a második kvadrupolba, ahol a prekurzor ion fragmentálódik. Az így kapott fragmens ionok továbbítódnak a harmadik kvadrupolba, ahol egy meghatározott fragmens ion kiválasztása történik. A detektálás során kapott spektrum görbe alatti területe arányos a tömegspektrométerbe bejutott anyagmennyiséggel, emiatt a módszer mennyiségi meghatározásra is alkalmas.

Kísérleteink során létrehoztunk egy SRM alapú relatív kvantitálási módszert az NLRC5 fehérje vizsgálatára. A módszer optimalizálását NLRC5 overexpresszáló sejtvonalakból származó mintákon végeztük el, majd ezt követően többféle sejtvonalból származó mintában összehasonlítottuk az NLRC5 fehérje mennyiségét.

First tutor
Name: 
Dr. Csősz Éva
Department: 
Biokémiai és Molekuláris Biológiai Intézet

Támogatók: Támogatók: Az NTP-TDK-14-0007 számú, A Debreceni Egyetem ÁOK TDK tevékenység népszerűsítése helyi konferencia keretében, az NTP-TDK-14-0006 számú, A Debreceni Egyetem Népegészségügyi Karán folyó Tudományos Diákköri kutatások támogatása, NTP-HHTDK-15-0011-es A Debreceni Egyetem ÁOK TDK tevékenység népszerűsítése 2016. évi helyi konferencia keretében, valamint a NTP-HHTDK-15-0057-es számú, A Debreceni Egyetem Népegészségügyi Karán folyó Tudományos Diákköri kutatások támogatása című pályázatokhoz kapcsolódóan az Emberi Erőforrás Támogatáskezelő, az Emberi Erőforrások Minisztériuma, az Oktatáskutató és Fejlesztő Intézet és a Nemzeti Tehetség Program