Feszültségfüggő kálium csatornák azonosítása differenciálódó porcsejtekben

Nyomtatóbarát változatNyomtatóbarát változat
Konferencia: 
2009/2010. tanévi helyi TDK konferencia
Szekció: 
Biokémia, Mikrobiológia, Immunológia
Szerző(k):
Katona Éva
Intézet:
Anatómiai, Szövet- és Fejlődéstani Intézet
Témavezető(k):
Dr. Zákány Róza
Juhász Tamás

A csirkeembriók végtagtelepeiből izolált kondrogenikus sejtekből létrehozott „high density” primer kultúrákban zajló porcdifferenciáció szabályozásában feltehetőleg fontos szerepet töltenek be a palzamamembrán különböző ioncsatornái. Kísérleteink során arra kerestük a választ, hogy a diffferenciálódó kondrogenikus sejtekben jelen vannak-e feszültségfüggő ioncsatornák és azok expressziós változásai korrelálnak-e a differenciáció lépéseivel. Munkánkban feszültségfüggő kálium csatornák (Kv) molekuláris biológiai azonosítását és azok porcképződésben betöltött szerepének felderítését tűztük ki célul.
RT-PCR és Western blot segítségével a Kv1.3 és Kv4.1 csatornákat sikerült detektálnunk, ahol a Kv1.3 expressziója mind mRNS, mind fehérje szinten a differenciáció előrehaladtával folyamatosan emelkedik. A Kv4.1 csatorna a porcdifferenciáció kulcsfontosságú napjainak tekintett 2. és 3. tenyésztési napon expressziós csúcsot mutat. Munkánk során a Kv csatornák specifikus blokkolásával határoztuk meg a csatornák differenciációban betöltöt szerepét, ehhez 0,6 és 20mM koncentrációban a tenyésztés során folyamatosan adagolva tetra-etil-ammóniumot (TEA) használtunk. A porctelepek savas DMMK festését követően megfigyeltük, hogy mindkét koncentrációban alkalmazott TEA jelentősen gátolta a metakromáziásan festődő porcmátrix kialakulását. MTT teszttel megállapítottuk, hogy a sejtek életképessége nem csökkent, ugyanakkor 3H-timidin beépülése alapján proliferációs rátájuk jelentős mértékben visszaesett. A porcdifferenciáció mértékét jelző transzkripciós faktor, a Sox9 és foszforilált aktívabb formájának fehérje expressziója TEA hatására csökkent. A porcmátrix kialakításában kulcsfontosságú aggrekán és II. kollagén mRNS expressziója is csökkenést mutat. Az inhibitor hatására a Kv1.3 fehérjeexpressziója csökkenést mutat, míg a Kv4.1 esetében enyhe növekedést detektáltunk.
Eredményeink alapján feltételezhető, hogy a Kv csatornák aktiválódása megváltoztatja a differenciálódó sejtek membránpotenciálját, amely (többek között) befolyásolja a sejtek osztódóképességét. További kutatásaink célja a Kv csatornák működéséhez köthető jelátviteli útvonalak azonosítása.

Támogatók: Támogatók: Az NTP-TDK-14-0007 számú, A Debreceni Egyetem ÁOK TDK tevékenység népszerűsítése helyi konferencia keretében, az NTP-TDK-14-0006 számú, A Debreceni Egyetem Népegészségügyi Karán folyó Tudományos Diákköri kutatások támogatása, NTP-HHTDK-15-0011-es A Debreceni Egyetem ÁOK TDK tevékenység népszerűsítése 2016. évi helyi konferencia keretében, valamint a NTP-HHTDK-15-0057-es számú, A Debreceni Egyetem Népegészségügyi Karán folyó Tudományos Diákköri kutatások támogatása című pályázatokhoz kapcsolódóan az Emberi Erőforrás Támogatáskezelő, az Emberi Erőforrások Minisztériuma, az Oktatáskutató és Fejlesztő Intézet és a Nemzeti Tehetség Program