Nyomtatóbarát változat

A „Thrittene” elnevezésű peptid szekvenciája azonos a somatostain N-terminális (1-13) aminosav szekvenciájával. Kimutatták jelenlétét az emlősök bélrendszerében, továbbá, hogy étkezés hatására felszabadul és bejut a keringésbe, azonban a peptid biológiai hatásai kellően még nem tisztázottak.
Célunk egy érzékeny és specifikus Thrittene RIA módszer kifejlesztése, amelynek segítségével vizsgálni tudjuk a peptid biológiai szerepét.
A RIA módszer kifejlesztése során C-terminális érzékenységű antiszérumot nyulak immunizálásával termeltettük Thrittene-marha szérum albumin antigén szubkután adásával. Az antitest kötődésének kimutatrására iodogénes módszerrel, 125I izotóppal jelölt, mono-jódozott Tyr-Thrittene-t használtunk. A kötődés számszerűsítéséhez Tyr-Thrittene peptidet használtunk 0-1000 fmol/ml közötti koncentráció tartományban.
Eredményeink szerint tíz egymást követő mérés során a kalibrációs görbe D50 értéke 8,61+/-1,22 fmol/ml-nek adódott. Az intra-assay variációs koefficiens 5,64 %, az inter-assay variációs koefficiens 8,39 % volt. Módszerünk kimutatási határa: 0,2 fmol/ml Thrittene volt. A keresztreakciós vizsgálatok kimutatták, hogy a RIA módszerünknél alkalmazott antiszérum csak jelentéktelen mértékű keresztreakciót adott a hasonló szerkezetű más peptidekkel. A vizsgált patkány szövetek Thrittene tartalmának megharározása során legnagyobb koncentrációt a vékonybélben (dudénum, jejunum, ileum) találtuk, habár jól kimutatható volt hipotalamusz, légcső, gyomor, vastagbél, végbél szövetekben is. Végül, radioaktív ligand kötődési kísérletekben sikerült azonosítanunk Trittene receptorokat agyszövetben (Bmax: 0,23/+-0,05 fmól/mg fehérje, Kd=9,5+/-1,8 nM, n=5).
Következtetés tehát, hogy a kifejlesztett Thrittene RIA módszerünk nagy érzékenységű és peptid specifikus. Alkalmas arra, hogy szöveti és plazma koncentráció meghatározásokat végezzünk vele, amelynek segítségével a peptidhormon biológiai szerepéről további információk nyerhetők.