A poli (ADP-ribóz) polimerázok szupercsaládja 16 tagból áll. Ezen tagok közül elsőként a PARP-1-et, majd később a PARP-2-t fedezték fel. Mindkét enzim katalitikus aktivitását a DNS törések aktiválják. A PARP-2 részt vesz a DNS repair rendszerek és a centromerek működésében. Más vizsgálatok in vivo is bizonyították fontosságát a DNS javításában és az egyedfejlődésben. A PARP-2 fehérje 3 doménre osztható fel. A fehérje N-terminális végén található a DNS-kötő domén, amelyet az E domén, végül pedig az F domén (katalitikus domén) követ. A fehérje auto-poly(ADP-ribozil)ációja az E doménen történik, valamint ez a domén felelős a fehérje-fehérje interakciók kialakulásáért is. A C-terminális F domén tartalmazza a PARP-okra jellemző ún. PARP-motívumot, amely a katalitikus helyeket hordozza. Affinitás-tisztítást követő tömegspektrometriás analízis során összesen 42 olyan fehérjét azonosítottak, amely a PARP-2-vel kölcsönhathat. Ezen fehérjék között megtaláljuk a sejtciklus, a sejthalál, a DNS hibajavítás, a DNS replikáció, a transzkripció, a metabolizmus, az energia háztartás és az RNS metabolizmus szabályozásában résztvevő fehérjéket.

Munkánk során a pBabe-PARP2 konstruktból a PARP-2 cDNS-ét fehérje termelő vektorokba klónoztam, majd a plazmidokat Escherichia coli kompetens sejtekbe transzformáltam. Két klónozási eljárás segítségével négyféle konstrukt létrehozása volt a célunk (pET28b-6xHis-PARP2, pET28c-3xFlag-PARP2, pET15b-6xHis-PARP2, pET15b-3xFlag-PARP2). Kísérleteinkben a Flag-tag-es vektorok létrehozásához ún. cirkuláris klónozási eljárást (CPEC), míg a His-tag-es vektorokhoz klasszikus klónozási eljárást használtunk. Ezeken belül azért volt szükség két fajta vektorra hogy kihasználjunk két féle antibiotikum rezisztenciát (pET28-kanamicin rezisztens, pET15-carbenicillin rezisztens).

Eredményként három jó konstruktot (pET28b-6xHis-PARP2, pET28c-3xFlag-PARP2, pET15b-6xHis-PARP2) kaptunk, ezeket miniprep készítés után restrikciós hasítással jellemeztünk. Későbbiekben célunk a negyedik konstrukt elkészítése és a sikeres konstruktok szekvenáltatása. A rekombináns fehérjék segítségével a PARP-2 kölcsönható fehérjéit fogjuk vizsgálni.