.A mikroszkópia célja ma már nem kizárólag az egy látómezőben látható sejtek, sejtstruktúrák alkotóinak láthatóvá tétele, hanem sejtkomponensek közötti funkcionális kapcsolatok feltárása, sejtstruktúrák és szöveti minták szintjén egyaránt. A digitális tárgylemez alapú hisztopatológia segítségével a szövettani metszetek digitálisan tárolhatók, elemezhetők, és újraelemezhetők. A jelenleg széles körben elterjedt tárgylemez szkennerek hematoxilin-eozin festett, ill. immunhisztokémiával jelölt mintákról készítenek transzmissziós felvételt. Mára azonban megjelentek az egyes komponensek, molekulák specifikus, multiplex jelölésére alkalmas fluoreszcenciás módszereket kiaknázni képes patológiai szkennerek is. Ezek közül jelenleg a 3DHistech által fejlesztett eszköz képes konfokális képalkotásra.

Munkám során ennek konfokális képalkotását, érzékenységét, képhomogenitását jellemeztem, továbbá vizsgáltam az eszköz alkalmasságát a Förster-féle rezonancia energia transzferen (FRET) alapuló molekuláris kölcsönhatás-mérésre.

Megállapítottam, hogy a konfokális egység és a kamera pontos összehangolásával a pontkiterjedési függvény (PSF) szimmetria indexe 0,6-ról 0,8-ra növelhető, mindemellett érdemes a kapott 3D képeken dekonvolúciót alkalmazni. A megvilágítás és detektálás egyenetlenségét korrigáló, minta intenzitás-eloszlására épülő algoritmusok a teljes detektált látómezőben jó vizuális eredmény adnak, de kvantitatív mérésekhez külső standardra, ill. a hasznos képterület csökkentésére van szükség. A jó jel-zaj arányú mérést igénylő FRET mérésekhez a detektálás érzékenysége – fluorofórtól függően – kb. kétszázezer epitóp sejtenként. Ennek megfelelő biológiai rendszereken sikeresen implementálható az intenzitás-alapú, spektrális átvilágításokra korrigált, pontos kvantitatív eredményt adó FRET protokoll, mely a konfokális mikroszkópban mérhető transzfer hatásfokkal egyező eredményeket ad.

Optimalizálást követően a FRET mérésre alkalmassá tett fluoreszcenciás patológiai szkenner kiválóan alkalmas lehet a prognózis-meghatározás hatékonyságának növelésére, elősegítve a személyre szabott orvoslás térnyerését.