A cornea hámhiányait annak körkörös határán, a limbusban található őssejtek pótolják. Ha a regeneráció elmarad, az epitheliális réteg transzplantációval is pótolható. A közelmúltban történt egy sikeres vizsgálat, melynek során mind limbális, mind conjuctivális sejtekből monolayert növesztettek kontaktlencse felszínére, amelyet a szaruhártyára felhelyezve kialakult a jellemző epithel.
Célunk a módszer adaptálása, és a létrehozott monolayer sejtbiológiai jellemzése volt. Munkám során cornea transzplantációból megmaradt konzervált limbusból és műtét során eltávolított conjuctivából sztereomikroszkóp alatt 1 mm2 -es szeleteket készítettem, melyeket epitheliummal lefelé kontaktlencsére helyeztem, majd optimalizált, hidrokortizont, inzulint és EGF-et tartalmazó médiumban tenyésztettem. A 23 limbális minta nem mutatott sejtkiáramlást, ugyanakkor a conjunctiva esetén sikeres volt a tenyésztés. A sejteket tartalmazó kontaktlencsét fagyasztva metszettem, majd a mintákat indirekt immunfluoreszcenciával jelöltem. A jelöléshez különböző, az irodalomban elfogadott és a munkacsoport által azonosított őssejt, ill. progenitor sejt markereket (C/EBPδ, ABCG2, ΔNp63), szaruhártyára jellemző epitheliális markert (citokeratin 3), és mesenchymális markert (vimentin) használtam. Kontrollként HEK293 mesenchymális, HeLa és SKBR3 hámeredetű, valamint HCET immortalizált cornea epithel sejteket is vizsgáltam. A detektálás lézer pásztázó mikroszkóppal történt.
A kontaktlencsére tenyésztett sejtek többségének magjában a C/EBPδ jelölődött, ami a konfluenciáig nőtt monolayer mitotikus inaktivitásából, valamint progenitor jellegéből egyaránt eredhet. Az ABCG2, ΔNp63 és citokeratin3 jelölődés gyenge volt. A vimentin csak a sejtek egy részében, de erősen jelölődött. Ez korrelál a limbus fokozott vimentin expressziójával és felveti annak lehetőségét, hogy a kontaktlencsén mesenchymális, és/vagy erősen dedifferenciálódott sejtek is voltak.
Eredményeink alapján a konzervált cornea limbus nem alkalmas epitheliális monolayer előállítására kontaktlencsén, de friss conjuctivális hámból ős-, ill. progenitor sejteket tartalmazó réteg növeszthető. A továbbiakban ennek differenciálódását kívánjuk jellemezni.