Célkitűzések
A Science folyóirat szerkesztősége az elmúlt év legjelentősebb tudományos áttörésének a a daganatok immunterápiájával kapcsolatos legújabb eredményeket választotta és külön kiemelte kiméra antigén receptorokhoz (CAR) kapcsolódó klinikai vizsgálatokat. Ezek a receptorok olyan szintetikus, két fő doménből álló fehérjék, melyekben az antigéneket specifikusan felismerni képes sejtfelszíni ektodoménhez (ScFv) a T-sejt receptor szignál doménjét (TCR gamma lánc) tartalmazó citoplazmatikus endodomén van kapcsolva. Jelen kutatásomban a melanomára specifikus, a tumorsejtek felszínén nagy fokban expresszálódó p97 melanotranszferrint vizsgáltam mint lehetséges terápiás célpontot az antigénre specifikus CAR-t expresszáló in vitro sejtes rendszeren.
Módszerek
Kísérleteimben MELUR humán melanoma sejtvonalat használtam. A citotoxikus T-limfocitákat humán vérből szeparáltam két lépésben. Először a teljes vérből gradiens centrifugálással elválasztottam a PBMC frakciót, majd negatív mágneses szeparálással (MACS) kinyertem a citotoxikus limfocitákat. A sejtek biotechnológiai módosítását lentivirális transzdukciós rendszerrel végeztem a kollaborációs partnertől kapott plazmidok felhasználásával. A transzdukció hatékonyságát Alexa-647 konjugált anti-humán IgG jelölést követően BD FACS Calibur áramlási citométerrel mértem, az effektor és target sejtek között kialakult szinapszisokat Zeiss LSM510 konfokális mikroszkóppal vizsgáltam.
Eredmények
Kísérleteimben sikeresen előállítottam egy p97 melanotranszferrin specifikus tumorantigént felismerni képes genetikailag módosított T-sejt populációt. Az összes szeparált limfocita 20%-a sikeresen transzdukálódott. Megállapítottam, hogy kokultúrában a kiméra antigén receptort expresszáló effektor T-sejtek felismerik a target sejteket és azokkal immunszinapszist képeznek. Mind a szinapszis mérete, mind a szinapszist képző sejtek száma az inkubációs idővel arányosan nőtt.
Következtetések
Megállapítottam, hogy a melanomára specifikus p97 melanotranszferrin antigén sikeresen alkalmazható terápiás célpontként kiméra antigén receptort expresszáló immunsejt-terápiás rendszerben.